37℃孵育2h，
37℃孵育20min，干扰素-γ（interferon-γ，
IFN-γ）等，流水洗3min；丙酮（Ⅰ、持续20～30min，具体分组况如下：甩去多余液体不洗；7）滴加即用型一PCNA、发挥促进管消退的作用；TGF-β可能通过正调节Clusterin/apoJ的表达而发挥促进管自然消退的作用。
Clusterin/apoJ和转化生长因子-β在不同时期管中的表达及相关袁尉力1秦兴2王绪凯2（1.中国科大学附属第四院口腔科，光学显微镜（Olympus公司，TNF-α）、
方法采用免疫组织化学方法检测不同时期管中Clusterin/apoJ、迄今为止，捞片后于58～60℃烤箱中30～60min使切片紧密黏附；2）切片脱蜡至水；3）新鲜配制3%过氧化氢室温孵育5～10min以灭活内源酶，透明，风干；二甲苯（Ⅰ、Clusterin/apoJ和TGF-β在管程中相互关系的研究。
Clusterin/apoJ和转化生长因子-β（TGF-β）在不同时期管发生、为真管）存档蜡块56例，PCNA为弱表达。
如碱成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor，一般为20～30min；11）苏木素轻度复染，0.01mol/LPBS洗2min×3次；8）滴加生物素山羊兔IgG或兔鼠IgG，
晚期）的肥大细胞进行计数分析，Clusterin/apoJ被认为是凋亡细胞亡的重要标志物[5]。[关键词]管；管内皮细胞；肥大细胞；Clusterin/apoJ；转化生长因子-β[中图分类号]R739.8[文献标志码]AExpressionandcorrelationofmastcell,以每5个视野（×200）下肥大细胞计数的平均值作为每张切片的肥大细胞平均计数值。退化期26例，硕
士[通讯作者]王绪凯，结论肥大细胞可能对管的消退进程起促进作用。退化早、室温10min，B试各1滴，进入增生晚期肥大细胞数目骤增；退化早期数目也较多，
中期的表达（P<0.01），其中PCNA是以管内皮细胞核内出现棕黄颗粒为应，在管自行退化过程中，TGF-β的表达水平以及采用甲苯胺蓝染法对各期肥大细胞进行染。辽宁沈；2.中国科大学口腔院口腔颌面外科， Clusterin/apoJ和TGF-β可能具有促进管内皮细胞凋亡，中期（P<0.01），1.4免疫组织化学法染和结果判定将
石蜡标本制备成4μm厚切片，染后背景为淡蓝，ArticleInfo[文章编号]1000－1182（2009）04－0361-05肥大细胞、 UIC/Olympus）
对进行甲苯胺蓝染的肥大细胞进行定量分析，配制成0.5%甲苯胺蓝溶液），WANGXu-kai2.（1.Dept.>）[Abstract]>Toinvestigatetheexpressionandcorrelation>（TGF-β）inthedifferentstages>（SABC）andtoluidineblue（TB）staintechniquewererespectivelyusedtodetecttheexpressionlevel>（P<0.01）.Therewasalsoremarkablestatisticaldifferencebetweentheearlystage>（P<0.01）.Theexpression>（P<0.01）.Theexpression>（P<0.01）.TherewasasignificantlypositivecorrelationbetweenClusterin/apoJandTGF-βinthedifferentstages>（P<0.01）.Theexpressionlevel>（P<0.01）.ConclusionMastcellmayplayapromotiveroleofapoptosisduringthespontaneousregulatetheexpressionofClusterin/apoJandpromotethespontaneousinvolutionofhumandermalhemangioma.[Keywords]hemangioma；vascularendothelialcells；mastcell；Clusterin/apoJ；transforminggrowthfactor-β[收稿日期]2008-12-11；[修回日期]2009-03-02[作者简介]袁尉力（1982—），
增生晚期（7～12月）17例， 晚期的表达（P<0.01）。计算每5个视野（×200）下的平均面积率（面积率=单位面积中应的总面积/单位面
积中细胞的总面积）。发展和自然消退的机制仍不清楚[1]。TGF-β）、吉林人， 无棕黄应物。退化晚期数目较退化早、 结果增生晚期肥大细胞计数明显多于增生早、中期明显减少（图1、肥大细胞胞浆内含紫红粗大颗粒者为甲苯胺蓝染。选用1%多聚-L-赖氨酸， 即用型鼠人Clusterin/apoJ单克隆体、Tel：晚期（P<0.01）。Clusterin/apoJ和TGF-β在增生晚期的表达明显于其在增生早、
而其中一些细胞因子如bFGF、 辽宁沈）[摘要]目的讨肥大细胞、测定每个高倍视野（highpowerfield，按照Mulliken分类标准并且结合增殖细胞核原（proliferatingcell>，
在管增生早期肥大细胞较少，增生期肥陈家坪核名 增生期管内皮细胞核肥大，因此有人推测是由于管内皮细胞凋亡导致管自然消退[2]。
0.01mol/LPBS洗5min×4次；10）DAB显：
同时根据儿的年龄将所有标本分为6个阶段[6]： 恒温水箱式摊片仪（BS2-I型，参照SABC免疫组化试盒说明书进行染。发展过程中的表达及相关。bFGF）、微波炉加热至96～100℃， Ⅱ）透明各15min，混匀后加至切片，蒸馏水洗3次；6）滴加正常工作清封闭液，
TB）（由中国科大学组织胚胎教研室提供，中、 2结果2.1肥大细胞计数各期肥大细胞计数见表1。所选标本术后均由2名理科师证明是真管。本实验对管不同时期（增生早、 流水洗5min；0.5%甲苯胺蓝染10～15s， 中、TGF-β等在管组织中的表达明显高于正常皮肤组织[3-4]。脱水，DPX封片。镜下控制应时间，男， 即用型鼠人PCNA单克隆体、不同时期中Clusterin/apoJ和TGF-β表达的平均面积率间具有显著正相关（P<0.01）。 所有儿术前未经过激素或其他物，无炎症应和组织坏， DAB显试盒及多聚赖氨酸（北京中杉金桥生物技术开发公司）。1.2试和仪器甲苯胺蓝（toluidineblue，核内弥漫分布棕黄
颗粒，大量管增生为主要理学征的良管变。增生早期（1～3月）4例，检验水准α为
0.05。QINXing-jun2,用型格兰仕微波炉（佛山格兰仕微波炉电器有限公司），
Ⅱ）脱水各2min，步骤为：
增生期30例，PCNA）表达况进行分组。上海用仪表厂）， 退化早期（1～3岁）10例，Clusterin/apoJ和TGF-β以细胞浆和细胞膜出现棕黄颗粒为应。非常符合
凋亡的过程，不同时期中肥大细胞计数与Clusterin/apoJ和TGF-β表达的平均面积率间具有显著正相关（P<0.01），
加D
AB试盒中A、1.5图像分析采用显微图像分析系统Metamorph/EvolutionMP5.0/BX51（US/JP，住院师，均为手术切除标本，烘片箱（上海华岩仪器设备有限公司）， 正常皮肤内PCNA为弱表达
。北京设备厂），SABC通用型免疫组织化学试盒、已发现肥大细胞分泌的许多细胞因子可以调控管内皮细胞的凋亡，退化早期肥大细胞计数明显多于退化中、PCNA表达；退化期管内皮细胞核扁平，室温10min，采用免疫组织化学法检测Clusterin/apoJ和TGF-β在不同时
期管中的表达及相关， 近年来国内外学者对该因子在其他肿方面的研究较多，1.3甲苯胺蓝快速染和结果判定将理标本蜡块切成4μm厚切片，退化中期（3～5岁）9例和退化晚期（5岁以上）7例。Clusterin/apoJ或TGF-β，Clusterin/apoJ和TGF-β免疫组织化学应颗粒的平均面积率行单因素方差分析和t检验，随后进入退化中期数目开始回落，HPF）下肥大细胞的数目，用以区分管增生期和退化期，室温显，
转化生长因子-β（transforminggr
owthfactor-β， 0.01mol/LPBS洗2min×3次；9）滴加试SABC， 取1mL蒸馏水，1）载玻片防脱片处理：显微镜下观察。二甲苯脱蜡至水化， 另取管周围正常皮肤组织6例作为对照。即用型兔人TGF-β单克隆体、以初步讨管自然消退的机制。 但对不同时期管内皮细胞表达Clusterin/apoJ原还缺乏专门的
研究。目前尚缺乏肥大细胞、将切片浸入0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液中，
是以管内皮细胞异常增殖、1材料和方法1.1标本收集中国科大学盛京院理科2005—2007年皮肤毛细管（又称草莓样管，阴对照组除细胞核染成蓝外，中树胶封片，
目前对管发生、肿坏因子-α（tumor>，1.6统计学分析采用SPSS11.0统计软件对不同时期管组织中肥大细胞的数目、
每张切片随机选取5个镜下视野（×200），同法对TGF-β和Clusterin/apoJ的表达进行定量分析， 蒸馏水洗3次；4）微波修复原：37℃孵育20min，每高倍视野下，采用Pearson相关分析法对不同时期管中肥大细胞数目与Clusterin/apoJ和TGF-β表达的平均面积率分别进行相关分析；对不同时期管中Clusterin/apoJ和TGF-β表达的平均面积率作相关分析。
2）。日本）。增生中期（4～6月）9例，组织切片机（YL3-A型，
